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刚地弓形虫(Toxoplasma gondii)是一种可感染包括人在内所有温血动物的细胞内寄生原虫，对人畜的危害很大，孕妇感染弓形虫后导致早产、流产、胎儿发育畸形，是当今致畸胎的四大原因之一，也是免疫功能低下患者死亡的主要原因(如AIDS病人等)。传统的显微镜病原体检查方法，检出率低；以抗体检测为主的血清学诊断方法不能准确反映弓形虫现时感染情况。PCR检测技术的发展为解决这些问题提供了更灵敏的方法。

1. 即开即用，用户只需要提供样品DNA模板。
   
2. 产品经过精心优化，分析灵敏性能到达100拷贝/反应。
   
3. 提供阳性对照，便于区分假阴性样品。
   
4. 特异性高，引物是根据刚地弓形虫DNA高度保守区设计，分析发现它只能检测刚地弓形虫，不会跟除此之外的其他生物的DNA发生交叉反应。
   
5. 本制品足够50次20μL体系的常规PCR反应。
   
6. 本制品只能用于定性实验，不能用于定量实验。
   
7. 本制品只能用于科研，严禁用于临床诊断。

1. 引物干粉在使用前需要短暂离心，然后在离心管中加入110μL的超纯水充分混匀后再使用，未用完的需要-20℃保存。
   
2. 为避免扩散传染性病原，本制品不提供活体样品做阳性对照，只提供专一的DNA片段作为阳性对照。

1. 如果有N个样品，必须设置N+2个提取反应，多出的两个中一个是PC(样品制备阳性对照)，一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用试剂盒提供的PCR阳性对照(1×10⁴拷贝/μL，本试剂盒提供)10μL加上一定量的水作为制备的阳性对照(加水后其总体积跟核酸制备试剂盒所要求的起始样品体积一样)。可以直接用水作为制备的阴性对照。
   
2. 用自选方法纯化上述N+2个样品的DNA。本试剂盒跟市场上大多数样品DNA提取试剂盒兼容。也可以选用本公司的相关的核酸提取试剂盒。

3. 标记N+4个PCR管，其中N+2个用于上步得到的DNA样品，额外增加的两个管一个用于PCR阳性对照，另一个用于PCR阴性对照。按照下表在各PCR管中加入下列成分：
   

   成分	N+2个 样品管	PCR 阴性对照	PCR 阳性对照
   2×PCR MasterMix	各10μL	10μL	10μL
   刚地弓形虫PCR引物混合液	各2μL	2μL	2μL
   制备的N+2个DNA样品	各8μL	不加	不加
   超纯水	不加	8μL	不加
   刚地弓形虫PCR阳性对照(1×104拷贝/μL)	不加	不加	8μL

4. 上机进行PCR，PCR反应参数：
   

   过程	温度	时间
   预变性	95℃	10分钟
   PCR反应 (30个循环)	95℃	30秒
   	55℃	60秒
   	65℃	60秒
   终延伸	72℃	10分钟

5. 取10μL扩增产物进行常规琼脂糖电泳，检测扩增效果，由于扩增产物较短，建议用1.5%～2.0%的琼脂糖凝胶。
   
6. 阳性样品预期得到的扩增产物长度为187bp。如果两个阴性对照(样品制备阴性对照或PCR阴性对照)有此扩增产物，说明环境污染，则整个实验无效，不需要分析实验结果。如果所有样品和PCR阳性对照均无此扩增产物，则说明有系统性的问题(试剂，设备，程序，操作等)，需要重复并排查原因。
   
7. 如果没有上述两种情况，则实验有效，可以分析样品的扩增结果。N+2个样品中扩增产物的判断为阳性，无则判定为阴性。